熒光多色顯微技術是多重成像技術的一個方面，可在同一實驗中觀察和分析同一樣本中的多種元素--每種元素都標記有不同的熒光染料。這不僅能提高實驗效率，還能獲得更可靠、更有意義的結果，從而了解細胞和組織內(nèi)的復雜過程。本圖集展示了使用THUNDER和STELLARIS平臺獲得的標有多種熒光探針的樣本圖像。

使用 STELLARIS 共聚焦

平臺進行多色成像

STELLARIS共聚焦顯微鏡系列配備了新一代白光激光器（WLL）。搭配Power HyD檢測器，STELLARIS可提供wanquan自由的光譜。您可以根據(jù)自己的研究需要進行多色實驗，而不受儀器的限制。通過使用TauSense工具集，STELLARIS還可以利用熒光染料/蛋白質基于生命周期的特性，為多色成像增加一個新的維度。

用TauSTED對活細胞中的細胞骨架和細胞膜

進行成像

使用STELLARIS STED采集的圖像。

TauSTED 775解析了用SiR-tubulin（熒光 - Spyrochrome）標記的錯綜復雜的細胞骨架網(wǎng)絡，以及用CF594（青色 - Biotium）標記的運輸囊泡。

內(nèi)吞途徑和線粒體動力學

使用STELLARIS STED采集的圖像。

用MitoView Green標記的線粒體。用CellBright NIR750標記的膜泡。使用TauSeparation，根據(jù)與囊泡內(nèi)吞成熟相關的pH值成熟步驟進行壽命成分分離，揭示不同的內(nèi)吞步驟。

用TauSTED對活細胞中的細胞骨架和細胞膜

進行成像

使用STELLARIS STED采集的圖像。U2OS細胞上的活細胞TauSTED，使用了肌動蛋白（SiR-actin，熒光）、微管（SPY555-tubulin，青色）和膜（CF488A偶聯(lián)WGA，綠色）標記。SiR和SPY可從Spirochrome購買。CF染料可從Biotium Inc.比例尺：10 微米。

用TauSTED對活細胞中的細胞骨架和細胞膜進行成像。

擬南芥（Arabidopsis thaliana）的根-下胚軸交界處

擬南芥（Arabidopsis thaliana）的根-下胚軸交界處：肌動蛋白（Lifeact-Venus，Era 等人，植物細胞生理學，2009年）、葉綠體（內(nèi)源性熒光）和細胞壁（碘化丙啶）。通過使用基于熒光壽命的信息，可以觀察到肌動蛋白網(wǎng)絡、細胞壁和葉綠體的復雜細節(jié)。圖片使用TauContrast技術獲取。樣本由海德堡大學COS的Melanie Krebs博士提供。

揭示細胞骨架和線粒體之間的相互作用

用SiR-Actin（657 - 740 納米檢測范圍）、AF750-Tom20（760 - 790 納米）、AF790-Tubulin（810 - 850 納米）標記的 Cos-7 細胞。

左圖：傳統(tǒng)砷化鎵檢測器所見。
右圖：配備Power HyD R檢測器的STELLARIS 8所見。光譜結果（右）顯示了實驗中使用的熒光團的激發(fā)光譜（灰色）和發(fā)射光譜（紅色）。
樣品提供：Jana D?hner 博士和 Urs Ziegler 博士。Urs Ziegler，蘇黎世大學。

充分利用活細胞實驗：更少曝光，更多信息

使用傳統(tǒng)共聚焦顯微鏡對同一樣本中的多個不同熒光標簽進行成像時，通常需要對每個顏色通道進行順序成像，以避免光譜串色而降低圖像質量。在動力學實驗中，這意味著由于獲取每個時間點所需的時間增加，您可能會錯過快速的動態(tài)事件。此外，樣品在臺上停留的時間更長，因此在實驗過程中保持細胞健康更具挑戰(zhàn)性。下圖是用4種不同的熒光團標記的活體 HeLa 細胞拍攝的圖像，用于識別細胞核、肌動蛋白、微管蛋白和質膜。有了STELLARIS，就可以一次性采集所有4個通道的圖像，而不必對細胞連續(xù)成像4次。

TauSTED 775解析了用SiR-tubulin（熒光 - Spyrochrome）標記的錯綜復雜的細胞骨架網(wǎng)絡，以及用CF594（青色 - Biotium）標記的運輸囊泡。

LAS X Navigator--用于實驗的GPS

上圖：小鼠胚胎（如第 X 頁所示）的201張拼接圖像的詳細視圖（單張圖像）。
(第 X 頁所示）的細節(jié)圖（單張）。透射光檢測器（TLD）成像，通過488納米、561納米和660納米的激發(fā)波長創(chuàng)建 RGB 疊加圖像。
488nm、561nm和638nm波長的激發(fā)，生成RGB疊加圖。
底部：與上述相同視場的TauContrast圖像，最大投影展示。

以 "光速 "探索

用LIGHTNING對細胞內(nèi)成分進行成像。

用STELLARIS 8采集的圖像。
用AF488（微管，灰色）、SPY555（肌動蛋白，品紅色）、MitoTrackerRed（線粒體內(nèi)腔，綠色）、Atto 647N（TOM 20，線粒體，紅色）和CF770 WGA（膜，青色）標記的U2OS細胞。