自21世紀初,隨著干細胞研究和組織工程的重大突破,類器官及其在顯微成像中的應(yīng)用取得了顯著進展。已開發(fā)的多種類器官模型,如大腦、肝臟和腸道類器官,為研究器官發(fā)育、疾病機制揭示及治療評估提供了新途徑。同時,類器官成像技術(shù)的發(fā)展極大地促進了研究人員對這些復(fù)雜三維結(jié)構(gòu)以細節(jié)和動態(tài)模式進行觀察的能力。盡管如此,類器官研究仍面臨多個挑戰(zhàn),包括維持樣本活性、確保成像深度與分辨率,及處理和分析大量數(shù)據(jù)的需求。
共聚焦顯微鏡物鏡的發(fā)展,特別是用于觀察厚樣本的物鏡,對匹配樣本和周圍介質(zhì)的折射率至關(guān)重要,否則會影響成像深度。高數(shù)值孔徑的油浸物鏡雖然提供高分辨率,但當用于水樣本時由于折射率不匹配而面臨限制,導(dǎo)致球面像差。這影響了能夠有效成像的樣本深度,并降低了圖像質(zhì)量。
為了解決這些挑戰(zhàn),研究人員開始使用甘油作為一種折射率接近生物樣本的介質(zhì),將樣本置于甘油中,并使用甘油物鏡進行成像。隨著技術(shù)的進步,甘油物鏡的設(shè)計和性能不斷改進,成為現(xiàn)代顯微鏡中常見的物鏡類型之一。
如今,大多數(shù)固定樣本都使用基于甘油的Mowiol、Vectashield或類似混合物進行封片。這些介質(zhì)的折射率接近80/20甘油/水混合物的折射率(ne=1.45)。甘油物鏡(介質(zhì)折射率1.46)是在這種介質(zhì)中封裝的樣本的更佳選擇。
由于折射率匹配,甘油物鏡減少了散射和光損失,在廣泛的波長范圍內(nèi)都具有較好的透明度,提高了圖像質(zhì)量和信號強度,因此可實現(xiàn)更深的成像深度
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